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PEI 40K Transfection Reagent

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货号:
FKU0115
产品规格:
10ml
购买数量:
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产品详情 操作说明 注意事项

产品简介

PEI 40K Transfection Reagent(线性化聚乙烯亚胺转染试剂),是一种以线性化聚乙烯亚胺为主体、分子量为40000的高电荷阳离子聚合物,其本身带正电,可以有效的结合带负电的核酸,与之形成复合物,并导入到细胞中,适用于细胞的质粒DNA转染。PEI 40K(线性化聚乙烯亚胺)转染试剂细胞毒性低,转染效率高且成本低,相较于脂质体类转染试剂,性价比极高。目前已经验证线性PEI 40K转染试剂广泛适用于多种细胞系包括HEK-293、HEK293T、CHO-K1、COS-1、COS-7、NIH/3T3、Sf9、HepG2和Hela细胞等,转染效率高达80%~90%。本产品主要成分PEI 40K浓度为1 mg/mL。



储存与运输

冰袋(wet ice)运输;4℃保存,有效期至少6个月;长期不用可-20℃保存更长时间,避免反复冻融。


组成

Component

G1802-1ML

G1802-10ML

PEI 40 K Transfection Reagent

1 mL

10×1 mL

产品说明书

1份


操作步骤

1. 贴壁细胞转染前准备工作(6孔板为例,其他规格参考附表):

a) 转染前一天,将细胞以合适的密度均匀种植于孔板中,以正式转染时细胞汇聚至70-85%为宜;

b) 转染前,去除原细胞培养基,用PBS清洗1-2次后,更换1.8 mL不含血清或者低血清(5%以下)的基础培养基,或Opti-MEM;不同细胞对于血清依赖性不同,根据具体细胞种类调整。

c) 将换好液的细胞放置于培养箱中,并开始配制转染复合物。

2. 悬浮细胞转染前准备工作:

a) 转染当天,将适量的细胞,离心去除培养基后,用不含血清或者低血清(5%以下)的基础培养基重悬;

b) 将准备好的悬浮细胞放置到培养箱中,并开始配制转染复合物,转染复合物和培养基之间的体积比,可以参考贴壁细胞的比值,进行适当调整。

3. 转染复合物准备:

a) 配制A液:100 μL不含血清的基础培养基与2 μg质粒DNA,吹吸混匀;

b) 配制B液:100 μL不含血清的基础培养基与6-8 μL PEI 40 K Transfection Reagent,吹吸混均;

c) 将B液加到A液中,轻轻吹打混均,室温孵育15 min,使其形成DNA-PEI转染复合物。

4. 转染细胞:

a) 将上一步得到的转染复合物,以画十字或者环绕的方式,滴加到之前换好液的孔板中;

b) 手持孔板在平面上画“8”字或其他的方式轻摇培养板,使其混合充分,置于37℃,5% CO2培养箱中孵育;

c) DNA-PEI转染复合物与细胞共同孵育4-6 h即有较好的转染效率,适当延长或过夜孵育,转染效率更佳。


注意事项

1. 请使用状态良好的健康细胞,复苏的细胞建议至少传代2次后再进行转染。

2. 请使用高质量、无内毒素的质粒DNA。

3. 转染时高浓度血清以及抗生素的使用,可能会影响细胞状态以及转染效率。

4. 不同的细胞耐受性、敏感性不一样,转染孵育时间长短,以及PEI/DNA使用比例,可视情况酌情调整。

5. 操作时请穿实验服,佩戴一次性手套。


附表:不同细胞培养容器转染使用量(仅供参考)

培养器皿

生长面积

cm2

接种细胞数

DNA量

(μg)

PEI

(μL)

转染复合物体积

(μL)

总体积

mL)

96孔板

0.3

(2-4)×104

0.1

0.3-0.4

10

0.1

24孔板

1.9

(1.2-2.4)×105

0.5-1

1.5-4

50

0.5

12孔板

3.8

(2.4-4.8)×105

1-2

3-8

100

1

6孔板

9.5

(6-10)×105

2-4

6-16

200

2

10 cm培养皿

55

(4-6)×106

12-24

36-96

1000

12

T75培养瓶

75

(6-10)×106

18-36

54-144

1000

15

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