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Calcein AM细胞活性检测试剂盒(CCK-F)

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货号:
FKU0181
产品规格:
100 T
购买数量:
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产品详情 操作说明 注意事项

产品描述

Calcein AM是在Calcein(钙黄绿素)的基础上,引入了一个乙酰甲氧基甲酯(AM)基团,AM基团不仅掩盖了Calcein螯合钙的分子部分且增强了其疏水性,因此可以使Calcein AM轻易穿透活细胞膜,被细胞内源性酯酶剪切为Calcein。失去AM基团的Calcein不能轻易通过细胞膜,从而被滞留在细胞内;此外螯合钙的分子部分被暴露出来,使得Calcein探针和活细胞内钙离子结合,并发出较强绿色荧光。而死细胞缺乏酯酶,并不能使Calcein AM被水解成能Calcein,故无法标记死细胞。Calcein AM细胞毒性低,对细胞功能影响较小,如细胞增殖或淋巴细胞的趋化性等,是一款非常适用于活细胞染色的荧光探针。

本产品Calcein AM细胞活性检测试剂盒也被称为细胞荧光计数试剂盒(Cell Fluorescence Counting Kit,CCK-F),是通过Calcein AM荧光探针标记活细胞,来评判细胞的活性、毒性、增殖的检测试剂盒。本试剂盒经过优化和调试,不仅检测灵敏度高、线性范围宽,且只需要短时间的孵育,便可完成对细胞的检测。操作简单,不需要放射性同位素标记、也不需要结晶溶解等步骤,可减少实验操作带来的误差,提高准确性和可重复性。


储存与运输

冰袋(wet ice)运输;


操作步骤

1. Calcein AM检测工作液配制:

根据96孔板每孔100 μL使用量,参考下表,将Calcein AM溶液CCK-F检测缓冲液按比例混合,配制成Calcein AM检测工作液

Component

10个样品

50个样品

100个样品

Calcein AM溶液

10 μL

50 μL

100 μL

CCK-F检测缓冲液

1 mL

5 mL

10 mL

2. 贴壁细胞检测:

以下步骤主要对应96孔板检测方案,其他孔板体系需视情况进行调整。

a. 细胞种板:将细胞按一定密度均匀接种于96孔板中,对其进行药物或者其他前处理(接种密度由细胞的大小、生长速度等因素决定);

b. (选做)细胞洗涤:吸取原培养基,用PBS缓冲液洗涤1-2次,减少血清、酚红或者药物对实验结果的干扰;

c. 探针标记:去除细胞培养基或PBS缓冲液后,加入100 μL Calcein AM检测工作液,于37℃避光孵育30 min;

d. (选做)细胞孵育:更换细胞培养基,继续孵育15-30 min,以确保细胞内Calcein AM充分水解;

e. 荧光检测:使用酶标仪进行荧光读数,Calcein AM探针最大激发光波长为501 nm,最大发射光波长为521 nm。细胞活性与荧光强度成正比。根据不同的实验目的,也可进一步复染细胞核或使用其他仪器(例如荧光显微镜)检测。

1. 悬浮细胞检测:

a. 细胞接种:将细胞按一定密度均匀接种于24孔板中,对其进行药物或者其他前处理(接种密度由细胞的大小、生长快慢等因素决定);

b. (选做)细胞洗涤:1000 g离心3-5 min去除原培养基,用PBS缓冲液洗涤1-2次,每次需要1000 g离心3-5 min,以减少血清、酚红或者药物对实验结果的干扰;

c. 探针标记:1000 g离心3-5 min后,去除细胞培养基或PBS缓冲液,加入适量Calcein AM检测工作液,于37℃避光孵育30 min;

d. (选做)细胞孵育:更换细胞培养基,继续孵育15-30 min,以确保细胞内Calcein AM充分水解;

e. 荧光检测:使用酶标仪或流式细胞仪对其进行荧光检测,Calcein AM探针最大激发光波长为501 nm,最大发射光波长为521 nm。细胞活性与荧光强度成正比。根据不同的实验目的,也可以进一步复染细胞核或用其他仪器(例如荧光显微镜)检测。


注意事项

1. Calcein AM溶液在使用前进行短时离心,以减少试剂损失。

2. Calcein AM溶液避免反复冻融,收到产品后建议适当分装,于-20℃避光密封保存。

3. Calcein AM在水溶液中不稳定,Calcein AM检测工作液需现配现用,24 h内有效。

4. 由于不同细胞状态不同,Calcein AM检测工作液孵育的时间和浓度可以视情况进行调整。

5. 使用酶标仪检测荧光强度时,请使用黑色细胞培养板。

6. 荧光染料存在淬灭问题,请避光操作和存放。

7. 为了您的健康和安全,操作时请穿好实验服、戴好手套。


本产品仅供科研用途,不用于临床诊断!

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