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SweScript RT I First Strand cDNA Synthesis Kit

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货号:
SJ21583
产品规格:
50 rxns
购买数量:
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产品详情 操作说明 注意事项

产品简介

本产品利用改造后的突变体逆转录酶以总RNA或mRNA为模板,高效逆转录合成第一链cDNA,试剂盒中包含合成高质量第一链cDNA所需的全部试剂,并提供两种cDNA合成引物供选择:Random Hexamer Primer和Oligo (dT)18 Primer,合成的单链cDNA产物可直接用来进行后续PCR或qPCR反应。SweScript RT I (Reverse Transcriptase)是基于M-MLV Reverse Transcriptase并通过体外进化筛选获得的突变体逆转录酶,SweScript RT I无RNase H活性,避免了第一链cDNA合成反应中DNA/RNA杂交体模板中RNA被降解,从而保证第一链cDNA合成量和长度;与野生型酶相比,SweScript RT I的热稳定性和合成效率大幅提高,可在42-55℃范围内高效合成cDNA,同时也可合成长达10 kb的cDNA。


储存与运输

冰袋(wet ice)运输;

-20℃保存,12个月有效期。


组成

Component Number

Component

G3330-50

G3330-100

G3330-1

SweScript RT I Enzyme Mixa

50 μL

100 μL

G3330-2

5×Reaction Bufferb

200 μL

400 μL

G3330-3

Oligo (dT)18 Primer (100 μM)

50 μL

100 μL

G3330-4

Random Hexamer Primer (100 μM)

50 μL

100 μL

G3330-5

Nuclease-Free Water

1 mL

1 mL

说明书


1份


1份

a:含有RNase Inhibitor

b:含有dNTP Mixture 和Mg2+

第一链cDNA合成步骤

1. 逆转录反应体系配制(推荐20 μL反应体系)

Component

Volume

5×Reaction Buffer

4 μL

Oligo (dT)18 Primer (100 μM)

1 μL

or Random Hexamer Primer (100 μM)

or 1 μL

or Gene Specific Primer (2 μM)

or 1 μL

SweScript RT I Enzyme Mix

1 μL

Total RNA/mRNA*

0.1 ng-5 μg/10 pg-0.5 μg

Nuclease-Free Water

Add to 20 μL

注:针对高GC或复杂模板,可预先混合RNA模板、逆转录引物、无核酸酶水并在65℃保温5 min后,迅速置冰上冷却。然后再加入其他反应组份。

2. 轻轻混匀并离心;

3. 逆转录程序设置

Temperature

Time

25℃a

5 min

50℃b

15-30 min

85℃

5 s


a:如选择使用Random Hexamer Primer,25℃孵育5 min后,再进行后续反应;如选择使用Oligo (dT)18 Primer或Gene Specific Primer,可直接进行50℃反应;

b:对于高GC或复杂模板,可将逆转录温度提高至55℃。



注意事项

1. 操作时请佩戴一次性手套,避免RNase污染。

2. 逆转录产物可以-20℃短期保存,若需长期保存,建议分装后,于-80℃保存,避免反复冻融。

3. 如模板为真核生物来源,建议选择Oligo (dT)18 Primer,与真核生物mRNA的3' Poly A尾配对,可获得最高产量的全长cDNA。

4. 原核生物RNA逆转录请选用Random Hexamer Primer或Gene Specific Primer。

5. Random Hexamer Primer适用性较广,适用于mRNA、rRNA、tRNA、small RNA和LncRNA等模板。

6. 如逆转录后续为qPCR实验,可将Oligo (dT)18 Primer与Random Hexamer Primer混合使用,可使mRNA的各个区域cDNA合成效率相同,有助于提高定量结果的真实性和重复性。


本产品仅供科研用途,不用于临床诊断!

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